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引文(wen)：本文(wen)將介紹無菌(jun)檢查(cha)方法驗證的具體要求與(yu)實施(shi)方法，同時還(huan)將對新(xin)GMP的檢查(cha)重(zhong)點進行(xing)剖析，最后(hou)本文(wen)總(zong)結了無菌(jun)檢查(cha)方法的注(zhu)意事項(xiang)，以(yi)幫助讀(du)者應對新(xin)GMP檢查(cha)中(zhong)容易出現的重(zhong)點問題。
無(wu)(wu)菌(jun)(jun)檢(jian)查方(fang)法(fa)(fa)是(shi)為了檢(jian)查藥典要(yao)求無(wu)(wu)菌(jun)(jun)的(de)(de)制(zhi)劑及其他制(zhi)品是(shi)否(fou)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)而建(jian)立的(de)(de)試驗方(fang)法(fa)(fa)，是(shi)作為無(wu)(wu)菌(jun)(jun)產(chan)品批放行(xing)的(de)(de)重(zhong)(zhong)要(yao)依據及藥監部門對無(wu)(wu)菌(jun)(jun)產(chan)品質(zhi)量監管(guan)的(de)(de)一個重(zhong)(zhong)要(yao)項目。因(yin)此如何確保(bao)(bao)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)檢(jian)查方(fang)法(fa)(fa)的(de)(de)準確可靠至關重(zhong)(zhong)要(yao)，而檢(jian)查方(fang)法(fa)(fa)的(de)(de)驗證(zheng)是(shi)保(bao)(bao)證(zheng)檢(jian)查結果的(de)(de)公正(zheng)、科學和(he)(he)準確的(de)(de)基礎，因(yin)此各個主要(yao)國家的(de)(de)GMP或藥典都對無(wu)(wu)菌(jun)(jun)檢(jian)查方(fang)法(fa)(fa)的(de)(de)驗證(zheng)提出(chu)了嚴(yan)格的(de)(de)要(yao)求，2010版(ban)中國藥典對分析方(fang)法(fa)(fa)驗證(zheng)和(he)(he)檢(jian)查的(de)(de)要(yao)求也(ye)有大幅度的(de)(de)提高，同時也(ye)是(shi)GMP檢(jian)查中檢(jian)查的(de)(de)重(zhong)(zhong)點和(he)(he)容易發現(xian)問題的(de)(de)區域。
驗證要求與方法
無菌檢查方法驗(yan)(yan)證一般分(fen)為前驗(yan)(yan)證和再驗(yan)(yan)證兩種。
前(qian)(qian)驗(yan)證(zheng)(zheng)，也稱預驗(yan)證(zheng)(zheng)，指(zhi)在無菌分析方(fang)法正式使用前(qian)(qian)，按照預定驗(yan)證(zheng)(zheng)方(fang)案(an)進(jin)行的(de)驗(yan)證(zheng)(zheng)。如果沒有(you)充分的(de)理由，任何檢(jian)查方(fang)法必(bi)須進(jin)行前(qian)(qian)驗(yan)證(zheng)(zheng)。
再驗(yan)證(zheng)，指(zhi)某一檢查方(fang)法(fa)經過驗(yan)證(zheng)并在(zai)使用一段時(shi)間后進行(xing)的(de)，旨在(zai)證(zheng)實已驗(yan)證(zheng)狀態沒有發(fa)生飄移(yi)而進行(xing)的(de)重新驗(yan)證(zheng)及對檢查方(fang)法(fa)進行(xing)修訂、改變時(shi)進行(xing)的(de)驗(yan)證(zheng)。
通(tong)常一個(ge)無(wu)菌(jun)產品(pin)的(de)(de)檢查流程為：首先基于(yu)產品(pin)的(de)(de)劑型、溶解(jie)度等性(xing)質，按(an)照藥(yao)典(dian)的(de)(de)要(yao)求確(que)定(ding)是(shi)(shi)否(fou)需(xu)要(yao)進行前處(chu)理;然后根據產品(pin)的(de)(de)特性(xing)是(shi)(shi)否(fou)有抑菌(jun)性(xing)，確(que)定(ding)是(shi)(shi)否(fou)需(xu)要(yao)增(zeng)加(jia)去除產品(pin)抑菌(jun)性(xing)的(de)(de)方法(fa);最后驗(yan)證(zheng)整(zheng)個(ge)檢查方法(fa)中用到的(de)(de)一切及試驗(yan)過程中的(de)(de)每一個(ge)環節包括樣(yang)品(pin)的(de)(de)預處(chu)理方式、檢查過程、培(pei)養條件等均不影(ying)響(xiang)樣(yang)品(pin)中微生物(wu)的(de)(de)生長。
這里，驗證的重點環節包(bao)括：
- 前處理方法直接影響后續步驟的效果和重現性，應是驗證的重點。
- 供試品中抑菌活性的去除是當前驗證工作的重點，尤其強調應充分驗證供試品本身對微生物生長的影響。
具體的驗證方法如下(xia)：
菌種的選擇
無菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢查方法驗證(zheng)中(zhong)通常選擇以下6種試驗中(zhong)常用的控制(zhi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的標準菌(jun)(jun)(jun)(jun)株，它(ta)們(men)分別(bie)代(dai)(dai)表(biao)不同類型的菌(jun)(jun)(jun)(jun)種: 枯草芽孢桿菌(jun)(jun)(jun)(jun) [CMCC(B)63 501]代(dai)(dai)表(biao)藥品中(zhong)常見的污染(ran)菌(jun)(jun)(jun)(jun)-芽孢桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)、金(jin)黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)(jun)(jun)(jun) [CMCC(B)26 003]代(dai)(dai)表(biao)革蘭陽性菌(jun)(jun)(jun)(jun)、生孢梭菌(jun)(jun)(jun)(jun) [CMCC(B)64 941]代(dai)(dai)表(biao)厭氧菌(jun)(jun)(jun)(jun)、大(da)腸(chang)埃希菌(jun)(jun)(jun)(jun) [CMCC(B)44 102]代(dai)(dai)表(biao)革蘭陰性菌(jun)(jun)(jun)(jun)、白色(se)念珠菌(jun)(jun)(jun)(jun) [CMCC(F)98 001]代(dai)(dai)表(biao)酵(jiao)母(mu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)、黑曲霉菌(jun)(jun)(jun)(jun) [CMCC(F)98 003]代(dai)(dai)表(biao)霉菌(jun)(jun)(jun)(jun)。
菌液的制備
接種金黃(huang)色葡萄球菌(jun)(jun)、大腸(chang)埃希菌(jun)(jun)、枯草芽孢桿菌(jun)(jun)的(de)新(xin)(xin)(xin)鮮(xian)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)物(wu)(wu)至(zhi)(zhi)(zhi)營養(yang)(yang)(yang)肉湯培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)中或營養(yang)(yang)(yang)瓊脂(zhi)(zhi)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)上，接種生孢梭(suo)菌(jun)(jun)的(de)新(xin)(xin)(xin)鮮(xian)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)物(wu)(wu)至(zhi)(zhi)(zhi)硫乙醇酸鹽流體(ti)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)中，30~35 ℃培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)18~24h;接種白色念珠菌(jun)(jun)的(de)新(xin)(xin)(xin)鮮(xian)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)物(wu)(wu)至(zhi)(zhi)(zhi)改(gai)良馬丁培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)中或改(gai)良馬丁瓊脂(zhi)(zhi)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)上，23~28℃培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)24~48h，上述培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)物(wu)(wu)用(yong)0.9%無(wu)菌(jun)(jun)氯(lv)化鈉溶液制(zhi)成每1ml含(han)菌(jun)(jun)數小于100cfu的(de)菌(jun)(jun)懸液。接種黑曲(qu)霉的(de)新(xin)(xin)(xin)鮮(xian)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)物(wu)(wu)至(zhi)(zhi)(zhi)改(gai)良馬丁瓊脂(zhi)(zhi)斜面培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)上，23~28 ℃培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)5~7天，加入3~5ml含(han)0.05%(ml/ml)聚(ju)山梨(li)酯(zhi)80的(de)0.9%無(wu)菌(jun)(jun)氯(lv)化鈉溶液，將孢子(zi)(zi)洗(xi)脫。然后(hou)，采(cai)用(yong)適(shi)宜(yi)的(de)方法吸出孢子(zi)(zi)懸液至(zhi)(zhi)(zhi)無(wu)菌(jun)(jun)試管內(nei)，用(yong)含(han)0.05%(ml/ml)聚(ju)山梨(li)酯(zhi)80的(de)0.9%無(wu)菌(jun)(jun)氯(lv)化鈉溶液制(zhi)成每1ml含(han)孢子(zi)(zi)數小于100cfu的(de)孢子(zi)(zi)懸液。
樣品的前處理
無(wu)菌產品(pin)中(zhong)每個(ge)成分應該是均(jun)勻(yun)的(de)，因此只(zhi)要確定(ding)在驗證的(de)方法(fa)中(zhong)，按所需(xu)的(de)總接種量即(ji)可，而不必像樣(yang)品(pin)日常檢測中(zhong)按規定(ding)的(de)容器(qi)數(shu)取樣(yang)。
如果制備樣(yang)品(pin)時(shi)需(xu)要(yao)使(shi)用溶(rong)(rong)解(jie)劑、稀釋(shi)劑、助溶(rong)(rong)劑、破乳劑等(deng)溶(rong)(rong)劑，需(xu)要(yao)確保這些溶(rong)(rong)劑是(shi)(shi)有(you)效的(de)、并(bing)且其(qi)使(shi)用對微(wei)生(sheng)物(wu)生(sheng)長無(wu)影響(xiang);或(huo)者制備過程(cheng)中需(xu)要(yao)對樣(yang)品(pin)進行加(jia)熱(re)助溶(rong)(rong)、離(li)心(xin)等(deng)操作是(shi)(shi)，需(xu)要(yao)確保加(jia)熱(re)的(de)溫度(du)(du)、離(li)心(xin)速度(du)(du)和離(li)心(xin)時(shi)間等(deng)對微(wei)生(sheng)物(wu)生(sheng)長或(huo)分布(bu)無(wu)影響(xiang)。不(bu)需(xu)前(qian)處理(li)的(de)樣(yang)品(pin)免做。
消除樣品抑菌性的方法
無抑菌性(xing)樣(yang)品的(de)驗證(zheng)方(fang)法：依據產品溶解性(xing)和微生物(wu)限度選擇合適(shi)的(de)中(zhong)(zhong)性(xing)稀(xi)釋(shi)劑溶解和稀(xi)釋(shi)，用(yong)(yong)直接接種法驗證(zheng)，常(chang)用(yong)(yong)中(zhong)(zhong)性(xing)稀(xi)釋(shi)液(ye)或淋洗液(ye)。
對于具有抑菌(jun)性樣(yang)品的驗證方法(fa)，首先(xian)確(que)定樣(yang)品的抑菌(jun)作用(抑細(xi)菌(jun)、真菌(jun)試驗驗證)，選(xuan)擇(ze)敏感標準(zhun)菌(jun)株對供試品抑菌(jun)活性去除效(xiao)果檢查(陽性菌(jun)回收(shou)試驗)。常用的消除樣(yang)品抑菌(jun)活性的方法(fa)如下：
- 稀釋法：利用降低供試品的相對濃度，將樣品稀釋至最低抑菌濃度下進行。如：取規定量的樣品溶液至較大量的培養基中，使單位體積內的樣品含量減少，至不含抑菌作用。
- 薄膜過濾法：利用體積差異分離，通過薄膜過濾，微生物被截于濾膜，培養薄膜觀察有無微生物生長。通常薄膜孔徑應不大于0.45μm，直徑一般為50mm，若采用其他直徑的濾膜，沖洗量應進行相應的調整。濾器和濾膜在使用前采用適宜的方法進行滅菌。使用時應保證濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試液其濾膜和濾器在使用前應充分干燥。供試液經過濾膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml。總沖洗量不得超過1000ml。
- 化學中和法：利用化學(生物)專屬性滅活，常用中和劑或滅活方法有：對氨基苯甲酸、卵磷脂、聚山梨酯-80等。對化學中和劑不敏感的樣品，用酶中和，如β -內酰胺酶。
- 聯合使用：將以上兩種或幾種方法組合運用，以消除樣品的抑菌性。適用于抑菌作用較強的中西藥制劑。
其次(ci)按照以(yi)下(xia)要求(qiu)制備三組樣品：
- 樣品組：選擇以上適當的方法中和樣品，加入少量驗證微生物(接種量少于100cfu)。
- 對照組：0.1%蛋白胨或pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液,加少量微生物(接種量少于100cfu)。
- 陽性對照組：將試驗菌株直接接種于培養基中(接種量少于100cfu)。
最后結果分析如下：
樣(yang)品(pin)組(zu)(zu)(zu)與(yu)(yu)對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)組(zu)(zu)(zu)微(wei)生(sheng)物(wu)生(sheng)長(chang)數量(liang)相(xiang)(xiang)似，表(biao)明中和(he)劑的中和(he)方式有效消除了(le)樣(yang)品(pin)的抑(yi)菌(jun)性(xing)(即(ji)(ji)有效性(xing))，如(ru)果(guo)對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)組(zu)(zu)(zu)與(yu)(yu)陽(yang)性(xing)對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)組(zu)(zu)(zu)的微(wei)生(sheng)物(wu)數量(liang)相(xiang)(xiang)似，表(biao)明樣(yang)品(pin)預(yu)(yu)處理、消除樣(yang)品(pin)抑(yi)菌(jun)性(xing)的方法、檢測程(cheng)序和(he)培養條件等均不影響微(wei)生(sheng)物(wu)生(sheng)長(chang)(即(ji)(ji)無毒性(xing))。樣(yang)品(pin)如(ru)無抑(yi)菌(jun)性(xing)，省去對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)組(zu)(zu)(zu)試驗，樣(yang)品(pin)組(zu)(zu)(zu)與(yu)(yu)陽(yang)性(xing)對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)組(zu)(zu)(zu)直接(jie)比較(jiao)。樣(yang)品(pin)組(zu)(zu)(zu)微(wei)生(sheng)物(wu)生(sheng)長(chang)數量(liang)不及(ji)陽(yang)性(xing)對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)組(zu)(zu)(zu)微(wei)生(sheng)物(wu)生(sheng)長(chang)數量(liang)，表(biao)明樣(yang)品(pin)的預(yu)(yu)處理、試驗用器具(ju)材料、培養條件等方面存(cun)在對(dui)(dui)微(wei)生(sheng)物(wu)生(sheng)長(chang)不利(li)的因素。
為考查驗(yan)(yan)證(zheng)方法的(de)穩定性和重(zhong)現性，驗(yan)(yan)證(zheng)至少需3個不同(tong)批(pi)次的(de)同(tong)類樣品，分別進行3次驗(yan)(yan)證(zheng)試驗(yan)(yan)。
無菌檢查方法驗證試驗設計
薄膜(mo)(mo)過(guo)(guo)濾(lv)法(fa)：按照(zhao)藥典的(de)(de)(de)(de)要(yao)求取(qu)每種(zhong)培(pei)養基規定接(jie)種(zhong)的(de)(de)(de)(de)樣品總量按薄膜(mo)(mo)過(guo)(guo)濾(lv)法(fa)過(guo)(guo)濾(lv)，沖洗，在最后一次(ci)的(de)(de)(de)(de)沖洗液中加(jia)入小(xiao)于(yu)100cfu的(de)(de)(de)(de)試驗菌，過(guo)(guo)濾(lv)。取(qu)出濾(lv)膜(mo)(mo)接(jie)種(zhong)至硫乙(yi)醇(chun)酸(suan)鹽(yan)流(liu)體培(pei)養或改良(liang)馬丁培(pei)養基中，或將培(pei)養基加(jia)至濾(lv)桶內。另取(qu)一裝有同體積培(pei)養基的(de)(de)(de)(de)容器，加(jia)入等量試驗菌，作為對照(zhao)。按照(zhao)藥典的(de)(de)(de)(de)要(yao)求的(de)(de)(de)(de)溫度和時間進行(xing)培(pei)養。
直(zhi)接(jie)(jie)(jie)接(jie)(jie)(jie)種(zhong)法(fa)：取符合直(zhi)接(jie)(jie)(jie)接(jie)(jie)(jie)種(zhong)法(fa)培(pei)養(yang)基用量要(yao)求(qiu)的(de)(de)硫乙醇酸鹽流體培(pei)養(yang)基8管，分(fen)別接(jie)(jie)(jie)入(ru)小于100cfu的(de)(de)金黃色葡萄球菌(jun)、大腸(chang)埃希(xi)菌(jun)、枯草芽孢桿菌(jun)、生(sheng)孢梭菌(jun)各(ge)2管;取符合直(zhi)接(jie)(jie)(jie)接(jie)(jie)(jie)種(zhong)法(fa)培(pei)養(yang)基用量要(yao)求(qiu)的(de)(de)改(gai)良馬丁(ding)培(pei)養(yang)基4管，分(fen)別接(jie)(jie)(jie)入(ru)小于100cfu的(de)(de)白色念珠菌(jun)、黑曲霉各(ge)2管。其(qi)中1管接(jie)(jie)(jie)入(ru)每支培(pei)養(yang)基規定(ding)的(de)(de)供(gong)試品(pin)接(jie)(jie)(jie)種(zhong)量，另1管作為對照，按照藥典的(de)(de)要(yao)求(qiu)的(de)(de)溫度和時(shi)間進行培(pei)養(yang)。
結果判斷
同對(dui)照管比較，如含(han)供(gong)試(shi)(shi)(shi)品各(ge)容(rong)器中的(de)(de)試(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)菌(jun)均生長(chang)(chang)良(liang)好，則說明(ming)驗(yan)(yan)證(zheng)通過;如含(han)供(gong)試(shi)(shi)(shi)品的(de)(de)任(ren)一容(rong)器中的(de)(de)試(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)菌(jun)生長(chang)(chang)微(wei)弱、緩慢或不生長(chang)(chang)，驗(yan)(yan)證(zheng)失(shi)敗(bai)，應采(cai)用(yong)增(zeng)加(jia)沖(chong)洗量、增(zeng)加(jia)培養基(ji)的(de)(de)用(yong)量、使用(yong)中和劑和滅活(huo)劑、更換濾膜等(deng)方法，消除供(gong)試(shi)(shi)(shi)品的(de)(de)抑菌(jun)作用(yong)，重(zhong)新進行驗(yan)(yan)證(zheng)。
新GMP檢查重點
首先(xian)要檢(jian)查(cha)方法驗(yan)證方案設計的科學(xue)性和完整(zheng)性，是否有與藥(yao)典方法相悖的地方，尤其(qi)是產品(pin)本身的抑菌性，檢(jian)查(cha)方法的選擇，是直接接種法還是薄(bo)膜過濾法等(deng)。
無(wu)菌(jun)檢查(cha)方法驗(yan)證的(de)(de)(de)硬件是否(fou)具備(bei)及(ji)是否(fou)已經(jing)進(jin)行(xing)了(le)相(xiang)關的(de)(de)(de)確(que)認。如(ru)使用黑曲霉菌(jun)是否(fou)具有生物安(an)全柜并進(jin)行(xing)確(que)認，無(wu)菌(jun)室的(de)(de)(de)確(que)認及(ji)日常監測(ce)，培養箱的(de)(de)(de)型號及(ji)數量和進(jin)行(xing)確(que)認的(de)(de)(de)情況等，智能(neng)集菌(jun)器(qi)、全封閉無(wu)菌(jun)試驗(yan)過(guo)濾培養器(qi)的(de)(de)(de)型號、性(xing)能(neng)，濾膜是否(fou)符合(he)規定等。
驗(yan)證中各(ge)個(ge)環節有關(guan)數據(ju)的真(zhen)實性，如產品本身抑(yi)菌(jun)性試驗(yan)數據(ju)，菌(jun)種回收率和培養基適用性和靈敏度檢查數據(ju)，菌(jun)種的傳代(dai)、銷毀和使用記錄(lu)，無菌(jun)檢查操作(zuo)記錄(lu)、培養記錄(lu)等(deng)。
無菌檢(jian)查中偏(pian)差(cha)的處(chu)理是否(fou)真的找到了(le)根(gen)本(ben)原(yuan)因(yin)(yin)，是否(fou)在(zai)沒有(you)確切的原(yuan)因(yin)(yin)前就對樣品重(zhong)新(xin)檢(jian)查并依據(ju)新(xin)的檢(jian)查結果(guo)放行產品。
驗(yan)證的方(fang)法與無(wu)菌(jun)(jun)檢查(cha)操(cao)(cao)作規(gui)程和(he)無(wu)菌(jun)(jun)檢查(cha)記錄(lu)是否完全一致，如(ru)操(cao)(cao)作步驟(zou)、檢查(cha)方(fang)法、檢查(cha)環境、試驗(yan)耗材均需與實際(ji)檢查(cha)操(cao)(cao)作規(gui)程及驗(yan)證過程完全相符(fu)。
為了(le)考查驗(yan)證(zheng)方法(fa)的(de)穩定性和重現性，驗(yan)證(zheng)時是否至(zhi)少(shao)采(cai)用了(le)3個不同批次(ci)(ci)的(de)同類(lei)樣品，分別進行了(le)3次(ci)(ci)驗(yan)證(zheng)試驗(yan)。
使用新(xin)的濾膜或過濾器(不同廠家或批號、型號)是否重新(xin)進行樣品試驗(yan)組、蛋(dan)白胨對照(zhao)組和陽性對照(zhao)組的驗(yan)證確(que)認(ren)。
除非樣品(pin)不能采(cai)用過(guo)濾(lv)的方法(難(nan)溶解)，企業是否(fou)采(cai)用全封(feng)閉的薄(bo)膜(mo)過(guo)濾(lv)法。
菌液的保存條件(jian)和(he)保存期限是否符(fu)合藥(yao)典的要求，對于(yu)黑曲霉孢子懸液是否有驗(yan)證的資料(liao)。
無菌檢查的注意事項
實(shi)驗室菌種(zhong)的處理(li)和(he)保存的程序應標準(zhun)化，以(yi)盡可能減少菌種(zhong)污染和(he)變異。
試(shi)驗時(shi)菌懸液(ye)并不是只(zhi)要(yao)活的(de)菌體就(jiu)行，而是要(yao)保持旺盛的(de)生命力，所(suo)以菌懸液(ye)存(cun)(cun)放(fang)時(shi)間不能太(tai)長。菌液(ye)制備后(hou)若在(zai)(zai)室溫下放(fang)置，應在(zai)(zai)2h內使用(yong)，若保存(cun)(cun)在(zai)(zai)2～8℃，可在(zai)(zai)24h內使用(yong)。黑曲霉孢子懸液(ye)可保存(cun)(cun)在(zai)(zai)2～8℃，在(zai)(zai)驗證(zheng)過(guo)的(de)貯存(cun)(cun)期內使用(yong)。
薄(bo)膜過(guo)(guo)(guo)濾法(fa)采(cai)用大樣(yang)品(pin)量集菌的方法(fa)，具有代表性，不(bu)易漏(lou)檢，儀器操作相對(dui)簡單。該系(xi)統(tong)是(shi)全(quan)封閉過(guo)(guo)(guo)濾系(xi)統(tong)，避免了操作過(guo)(guo)(guo)程(cheng)中外源性微生(sheng)物的污染(ran)，對(dui)試(shi)驗結(jie)(jie)果(guo)的可(ke)信(xin)性影響(xiang)較小(xiao)。因此(ci)無菌試(shi)驗采(cai)用薄(bo)膜過(guo)(guo)(guo)濾法(fa)還是(shi)直接(jie)接(jie)種法(fa)并不(bu)依賴于(yu)驗證(zheng)結(jie)(jie)果(guo)，而是(shi)取決于(yu)樣(yang)品(pin)的特性，如能采(cai)用過(guo)(guo)(guo)濾的方法(fa)均(jun)應采(cai)用薄(bo)膜過(guo)(guo)(guo)濾法(fa)檢查。
若樣品含有(you)抑(yi)菌成(cheng)分(fen)，當采用薄膜過濾法時，應先將供試(shi)液(ye)稀釋(shi)后在過濾，這樣可以(yi)減少(shao)(shao)濾膜對樣品的吸附(fu)，減少(shao)(shao)沖洗量，進而減少(shao)(shao)微生(sheng)物的損失或傷(shang)害。
無菌檢查(cha)應作(zuo)為穩定性(xing)考察的(de)項目進行，以便(bian)對(dui)產(chan)品有效期(qi)的(de)制定和合理的(de)確定儲存條件提(ti)供(gong)重要(yao)的(de)依據。
陽(yang)性(xing)結(jie)果(guo)的(de)調(diao)查(cha)：在無(wu)菌檢查(cha)中必須(xu)小心防止任何(he)可(ke)能污染(ran)樣品(pin)(pin)(pin)的(de)行(xing)為(wei)。一旦(dan)發現微生(sheng)物生(sheng)長，該批產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)就(jiu)被判斷(duan)非無(wu)菌，必須(xu)進(jin)行(xing)調(diao)查(cha)。只(zhi)(zhi)有(you)可(ke)以(yi)造成微生(sheng)物生(sheng)長的(de)明確原因被找出，方可(ke)認為(wei)最初的(de)陽(yang)性(xing)測試結(jie)果(guo)無(wu)效。只(zhi)(zhi)有(you)確定且書(shu)面記載的(de)證據清(qing)楚地證明污染(ran)發生(sheng)在測試過程(cheng)中，方可(ke)進(jin)行(xing)重新測試。如(ru)果(guo)已(yi)有(you)證據不明確，產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)也必須(xu)按照不符合(he)無(wu)菌需求的(de)產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)那樣拒(ju)絕放行(xing)并(bing)報廢。在綜(zong)合(he)考慮所有(you)與(yu)產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)制造和樣品(pin)(pin)(pin)測試相關(guan)的(de)因素后(hou)，必須(xu)匯(hui)總成為(wei)書(shu)面的(de)調(diao)查(cha)報告，涵蓋確切的(de)結(jie)論和整(zheng)改措施(shi)。
試(shi)驗(yan)(yan)操作流程及數(shu)據的(de)關(guan)聯性(xing)、銜接及可追溯性(xing)。如儀器使用記(ji)(ji)錄和(he)試(shi)驗(yan)(yan)記(ji)(ji)錄的(de)一致(zhi)，智(zhi)能集菌器型號數(shu)量與試(shi)驗(yan)(yan)記(ji)(ji)錄一致(zhi)，菌種收、存、使用記(ji)(ji)錄與試(shi)驗(yan)(yan)記(ji)(ji)錄的(de)一致(zhi)。
本文作者：王彥忠
中(zhong)美(mei)史(shi)克制藥(yao)有限公司質量部驗(yan)證經理(li)，國(guo)家食品藥(yao)品監督(du)管(guan)理(li)局培(pei)訓中(zhong)心客座教授(shou)。
本文來源：《制藥(yao)業(ye)》
